測(cè)序樣品相關(guān)說(shuō)明
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樣品類型
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注意事項(xiàng)
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細(xì)菌
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1.通用載體或自己構(gòu)建的載體，都請(qǐng)注明載體名稱、抗生素類型以及具體測(cè)序引物。
2.我們提供Amp，Kan,Tet及Chl四種抗生素；特殊抗性、特殊培養(yǎng)條件的樣品，請(qǐng)您提供已經(jīng)培養(yǎng)好的5ml新鮮菌液或沉淀好的菌體。
3.如果是病毒(包括噬菌體)DNA，低拷貝質(zhì)粒以及BAC DNA，請(qǐng)您純化好模板直接用于測(cè)序。
4.建議您提供穿刺菌。如果是菌液則必須是新鮮的；加甘油后冷凍保存的菌株請(qǐng)您復(fù)蘇后再提供。
5.樣品太少會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)甚至出現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)菌失敗，以至延誤您的實(shí)驗(yàn)，所以提供的菌液至少200ul以上。
6.務(wù)必注明是否有特殊結(jié)構(gòu)：GC rich;GC cluster、Poly(A)、Poly(T)、重復(fù)序列及引物同源序列等。
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質(zhì)粒
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1.為確保測(cè)序的成功率和質(zhì)量，建議您盡量提供菌種測(cè)序。
2.因特殊原因只能提供質(zhì)粒模板測(cè)序時(shí)，必須保證質(zhì)粒是高純度的，而且須溶解在滅菌的去離子水中而不是TE中。濃度大于100ng/ul，體積10ul以上，注明抽提方法。
3.如果是病毒(包括噬菌體)DNA，低拷貝質(zhì)粒以及BAC DNA，請(qǐng)純化好模板直接用于測(cè)序。
4.插入片段有特殊結(jié)構(gòu)時(shí)必須注明，特別是含有通用引物的同源序列。
5. 務(wù)必注明是否有特殊結(jié)構(gòu)：GC rich;GC cluster、Poly(A)、Poly(T)、重復(fù)序列及引物同源序列等。
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PCR產(chǎn)物
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1.原則上收取高質(zhì)量的PCR原液， 片段大小為200～1500bp。
2.取3ul原液電泳檢測(cè)，為明亮單一條帶。
3.提供未純化產(chǎn)物測(cè)序，PCR原液不少于50ul；須注明產(chǎn)物的體積、片段大小、濃度，是否經(jīng)過(guò)Agarose膠純化。
4.提供已純化的產(chǎn)物測(cè)序，體積不少于15ul，PCR產(chǎn)物須溶解在滅菌的去離子水中而不是TE中；注明提供PCR產(chǎn)物的體積、片段大小、濃度，是否經(jīng)過(guò)Agarose膠純化。
5.提供的測(cè)序引物，濃度不低于5pmol/ul(5umol/L),要求PAGE純化，體積15ul以上，樣品多將適當(dāng)增加量。
6. 務(wù)必注明是否有特殊結(jié)構(gòu)：GC rich;GC cluster、Poly(A)、Poly(T)、重復(fù)序列及引物同源序列等。
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備注
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我們?yōu)槟峁┑拿赓M(fèi)通用測(cè)序引物信息。
2.隨機(jī)引物（RAPD）、含簡(jiǎn)并堿基或長(zhǎng)度小于15的引物不適合用于測(cè)序。
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三、測(cè)序報(bào)告說(shuō)明
1.提供報(bào)告的形式：
結(jié)果出來(lái)的第一時(shí)間我們將用email 將序列發(fā)到您的信箱，隨后送出測(cè)序報(bào)告。測(cè)序報(bào)告包括彩色圖譜一份和相應(yīng)序列文本。
對(duì)于15個(gè)以下的測(cè)序，在提供書(shū)面報(bào)告的同時(shí)會(huì)提供一張軟盤(pán)，里面包括Chromes軟件、序列和圖譜文件。
大量測(cè)序的報(bào)告將采用光盤(pán)的形式提供結(jié)果，并附上一些最常用的序列分析軟件。
2.查看測(cè)序報(bào)告方法：
先閱Chromes軟件及其補(bǔ)丁使用方法文檔。
運(yùn)行Chromes補(bǔ)丁等程序（否則軟件60天試用期過(guò)后，將只能打開(kāi)圖譜，而不能進(jìn)行其他任何操作）.
3.特殊情況的說(shuō)明:
下列特殊情況下只發(fā)E-mail不提供測(cè)序報(bào)告（不收費(fèi)）：
下列特殊情況下只發(fā)E-mail不提供測(cè)序報(bào)告（不收費(fèi)）：
應(yīng)信號(hào)極弱甚至沒(méi)有反應(yīng)信號(hào)。
信號(hào)極其雜亂，無(wú)法得到有用信息。
由于DNA結(jié)構(gòu)上的原因，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)反應(yīng)中途無(wú)法進(jìn)行之情況。如：GC rich;G、C cluster;Poly(A)、Poly(T)的連續(xù)結(jié)構(gòu)等。此外，另一種情況為反應(yīng)中途出現(xiàn)套峰現(xiàn)象。此種情況一般為由于DNA結(jié)構(gòu)中的重復(fù)序列，造成測(cè)序用引物和模板之間有二個(gè)以上的結(jié)合點(diǎn)。以上為由于DNA結(jié)構(gòu)原因造成了無(wú)法正常進(jìn)行DNA測(cè)序，對(duì)這種情況我們須按照正常反應(yīng)收費(fèi)。出現(xiàn)以上情況后我們提倡從另一個(gè)方向進(jìn)行測(cè)序。
如DNA本身或引物等的原因，測(cè)序反應(yīng)從開(kāi)始就無(wú)法進(jìn)行，此時(shí)按反應(yīng)失敗計(jì)算。反應(yīng)失敗保證做第二次。如第二次同樣情況失敗。按標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)的半價(jià)收費(fèi)。