什么是化學發(fā)光?
化學發(fā)光:在常溫下由化學反應產(chǎn)生的光,產(chǎn)生電子能級處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì),后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子,從而導至的發(fā)光現(xiàn)象?;瘜W發(fā)光是一個多步驟的過程。
化學發(fā)光按照發(fā)光時間可分為:
閃光(Flash): 發(fā)光時間在數(shù)秒內(nèi),如吖啶酯,以原位進樣和時間積分法測量。
輝光(Glow): 發(fā)光時間在數(shù)十分鐘以上,如:HRP-Luminol系統(tǒng)、AP-AMPPD系統(tǒng)、黃嘌呤氧化酶系統(tǒng),無須原位進樣,以速率法測量。
什么是化學發(fā)光免疫分析?
化學發(fā)光免疫分析(CLIA) 誕生于1977年,是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析,將高靈敏的化學發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應結(jié)合起來建立的微量測定技術(shù),因此該技術(shù)靈敏度高、線性范圍寬、應用范圍廣。
根據(jù)發(fā)光體系的不同進行分類,可將化學發(fā)光分為:化學發(fā)光免疫分析、化學發(fā)光酶免疫分析、電化學發(fā)光免疫分析法、光激化學發(fā)光免疫分析。
化學發(fā)光免疫分析(直接化學發(fā)光)
化學發(fā)光免疫分析(CLIA),用化學發(fā)光試劑直接標記抗體或抗原的一類免疫檢測方法。
魯米諾類標記的化學發(fā)光免疫分析:魯米諾類物質(zhì)的發(fā)光為氧化反應發(fā)光。在堿性溶液中,魯米諾可被許多氧化劑氧化發(fā)光,其中H2O2最為常用。
吖啶酯類標記的化學發(fā)光免疫分析:吖啶酯在H2O2和OH-條件下,能迅速發(fā)光,吖啶酯衍生物標記效率高且穩(wěn)定性好,因此吖啶酯作為標記物用于免疫分析,發(fā)光體系簡單、成本低,具有較低本底且能快速檢測。
化學發(fā)光酶免疫分析(酶促化學發(fā)光)
化學發(fā)光酶免疫分析(CLEIA)屬酶免疫分析,只是酶反應的底物是發(fā)光劑。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP )和堿性磷酸酶(ALP)。
電化學發(fā)光免疫分析
電化學發(fā)光免疫分析(ECL)是指由電化學反應引起的化學發(fā)光過程。ECL的反應在電極表面進行,發(fā)光底物為三聯(lián)吡啶釕,以三丙胺(TPA)來激發(fā)光反應,它包括電化學和化學發(fā)光兩個過程。ECL的突出優(yōu)點:標記物非常穩(wěn)定;發(fā)光時間長、靈敏度高、線性范圍寬、反應時間短。