發(fā)光的機理

發(fā)光反應中在形成電子激發(fā)態(tài)中間體之前，聯(lián)結于吖啶環(huán)上的不發(fā)光的取代基部分從吖啶環(huán)上脫離開來，即未發(fā)光部分與發(fā)光部分分離，因而其發(fā)光效率基本不受取代基結構的影響。

水解機理

吖啶酯和吖啶酰胺在酸性溶液中(pH小于4.8)都很穩(wěn)定，該類化合物及其與蛋白的偶聯(lián)物在室溫下保存4周，其光量子產(chǎn)率不降低；凍干品在-20℃下，可保存一年以上。但當pH大于4.8(尤其是在堿性溶液中),吖啶酯和吖啶酰胺類化合物由于發(fā)生部分水解而降低其穩(wěn)定性，水解機理。在水溶液中當其受到OH-進攻時生成一假堿，假堿繼續(xù)在OH-作用下酯鍵斷裂，最后生成N-甲基吖啶酮，水解過程為不發(fā)光的暗反應過程。

不同點：

抵抗水解的能力不同

吖啶類化合物在水溶液中的水解程度，隨pH值增大而增大；隨溫度升高而增大。大多數(shù)吖啶酰胺類化合物的穩(wěn)定性較吖啶酯類高，其原因是由于C-N鍵與C-O鍵的鍵級不同,C-N鍵大于C-O鍵；吖啶酰胺類化合物抵抗水解的能力強于吖啶酯類。

熱穩(wěn)定性不同

對于吖啶化合物來說，吖啶環(huán)及酚環(huán)或苯磺酰環(huán)上，不連取代基與連接不同取代基其穩(wěn)定性不同。通常吖啶環(huán)或酚環(huán)或苯磺酰環(huán)上,連有甲基等取代基的吖啶酯或吖啶磺酰胺，由于空間位阻大的原因熱穩(wěn)定性增加，連有吸電子基團時，因有利于親核取代反應而使穩(wěn)定性降低。

相同點：

無需催化劑

吖啶酯或吖啶磺酰胺類化合物化學發(fā)光不需要催化劑，在有H2O2的稀堿性溶液中即能發(fā)光,具有許多優(yōu)越性，特別是無須一個催化過程，也不需要增強劑，從而降低了背景發(fā)光，提高了信噪比，干擾作用少。

易于與蛋白質(zhì)聯(lián)結

該類化合物作為化學發(fā)光免疫分析的發(fā)光標記物，還具有其它方面的優(yōu)點,如光釋放快速集中、發(fā)光效率高、發(fā)光強度大，易于與蛋白質(zhì)聯(lián)結且聯(lián)結后光子產(chǎn)率不減少、標記物穩(wěn)定，在2-8℃下可保存數(shù)月之久，因此吖啶酯或吖啶磺酰胺是一類非常有效的化學發(fā)光標記物。

發(fā)光類型

這類化合物發(fā)光為閃光型，加入發(fā)光啟動試劑后,0.4s左右發(fā)射光強度達到最大，半衰期為0.9s左右。吖啶酯或吖啶磺酰胺類化合物應用于CLIA,通常采用的體系是Acridiniumester/H2O2系統(tǒng)，即用吖啶酯或吖啶磺酰胺標記抗體或抗原，用HNO3+H2O2和NaOH作發(fā)光啟動試劑。有些在發(fā)光啟動試劑中加入TritonX-100，CTAC，Tween-20等表面活性劑以增強發(fā)光。