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現貨 Human PKCa ELISA Kit

 
 
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型號 96T
過期 長期有效
更新 2015-04-27 09:43
 

上海武昊經貿有限公司

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  • 上海
  • 上次登錄 2015-04-27
  • elisa (女士)  
詳細說明
   ELISA 貨號:071918Hu
ELISA 英文名:ELISA Kit for Protein Kinase C Alpha (PKCa)
ELISA 中文名:
蛋白激酶Cα(PKCα)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
適用生物:Homo sapiens (Human)
產品應用:ELISA(僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!)
質量認證:SGS,ISO 9001:2008;ISO 13485:2003

[操作步驟]

1、 加樣:分別設標準孔、待測樣品孔、空白孔。設標準孔7孔,依次加入100μL不同濃度的標準品(見試劑準備2)。空白孔加100μL(見試劑準備第二步最后一管),余孔加待測樣品100μL,酶標板加上覆膜,37oC溫育2小時。

2、 棄去液體,甩干,不用洗滌。

3、 每孔加檢測溶液A工作液100μL(臨用前配制),酶標板加上覆膜,37oC溫育1小時。

4、 棄去孔內液體,每孔用350μL的洗滌液洗滌,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體,在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次(也可輕拍將孔內液體拍干),重復洗板3次。最后一次洗滌后,要把孔內的洗滌液完全甩干。自動洗板機亦可。

5、 每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100μL,加上覆膜,37oC溫育30分鐘。

6、 棄去孔內液體,甩干,洗板5次,方法同步驟4。

7、 每孔加底物溶液90μL,酶標板加上覆膜,37oC避光顯色(反應時間控制在15-25分鐘,不要超過30分鐘。當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。

8、 每孔加終止溶液50μL,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。如出現顏色不勻一,請輕輕晃動酶標板以使溶液混合均勻。

9、 在確保酶標板底無水滴及孔內無氣泡后,立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(O.D.值)。

注意

1、 試劑準備:準備一次實驗所需要的酶標條,其它的可從微孔板上拆下,密封,按照說明書要求保存,以備下次使用。

2、 加樣:實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。加樣時注意不要有氣泡,將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。加樣或加試劑時,第一個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。因此,一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)最好控制在10分鐘內。推薦設置復孔進行實驗。

3、 溫育:為防止樣品蒸發,實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內,以避免液體蒸發,洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態,同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。

4、 洗滌:充分的洗滌非常重要,在每次洗滌過程中,都要將洗滌液完全甩干。洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響最后的酶標儀讀數。如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實 驗過程中。

5、 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘觀察一次),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

6、 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7、 如果實驗室內濕度低于60%,推薦使用加濕器提高濕度水平。


僅供參考,以隨貨說明書為準,更多產品如酶聯免疫試劑盒(ELISAkit;ELISA 試劑盒);化學發光試劑盒(CLIA試劑盒;CLIAkit) ;抗體(antibody);蛋白(protein);鱟試劑;內毒素工作標準品;內毒素指示劑;無熱原檢查用水;無熱原吸咀;紫外燈;色譜儀;色譜柱等詳情信息請登錄上海武昊公司官方網站***.wuhaosh.* // 或致電021-60875268 // 咨詢或QQ:1292512665 // 或wuhao@wuhaosh.*


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